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    項(xiàng)目介紹

           可檢測任意兩種分子間的相互作用，它可以簡單地通過測量兩個(gè)溶液相互作用時(shí)吸收或放出的熱量來提供分子相互作用的重要信息，如結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、自由能、焓和熵。

    分子間相互作用過程中價(jià)鍵的形成和破壞需要釋放或者吸收能量，絕大部分化學(xué)和生化過程也都伴隨著熱量的吸收和釋放，微量熱檢測的是最基本、最普遍的物理量-熱量變化。儀器靈敏度的提高讓檢測mcal或者ncal水平的熱量成為可能，樣品的用量也隨著儀器設(shè)計(jì)的進(jìn)步而減少到可以接受的程度，ITC 儀能實(shí)現(xiàn)微量研究。被分析的樣品始終處于天然的溶液狀態(tài)和構(gòu)象，無需修飾。測試過程非光學(xué)檢測，樣品顏色、內(nèi)在熒光、透明度對(duì)實(shí)驗(yàn)沒有影響。熱量測定可以在廣泛的溶液環(huán)境和溫度條件下進(jìn)行，所以 ITC 儀能對(duì)廣泛的樣品進(jìn)行測試分析。技術(shù)特點(diǎn)：分子量范圍廣、溶液中檢測、無需標(biāo)記、廣泛適用性。


                                                                           

    樣品要求

    核酸-小分子、生物分子-細(xì)胞相互作用、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)等，可以檢測任意兩種小分子之間的結(jié)合力。

    要求檢測樣品的純度高，抑制劑等溶劑需提供分子量。樣品濃度越高越好，確保緩沖液、pH、DMSO匹配。

    最少樣品量：蛋白2mg，小分子10mM/500ul，蛋白多肽需低溫寄送。

    項(xiàng)目案列

    點(diǎn)陣圖

    熱量圖

    常見問題

    KD，C-value與反應(yīng)物濃度的選擇

    KD=弱結(jié)合，需要更高的配體濃度來飽和結(jié)合位點(diǎn)。低KD=強(qiáng)結(jié)合，只要較低的配體濃度就能飽和結(jié)合位點(diǎn)。因此，KD對(duì)選擇合適的反應(yīng)物濃度至關(guān)重要。

    如果不清楚KD，可按經(jīng)驗(yàn)濃度范圍進(jìn)行準(zhǔn)備，樣品池一般為10uM~10mM，滴定針比樣品池濃度一般高10-20倍，建議初始嘗試200uM滴20uM

    反應(yīng)物濃度=C-value*KD*N，C-value值一般在10-100之間實(shí)驗(yàn)結(jié)果最好。C-value太低，點(diǎn)陣圖曲線很難達(dá)到飽和。C-value太高，點(diǎn)陣圖曲線爆炸式地達(dá)到飽和。

    為什么ITC要求上下樣品間的緩沖液必須匹配呢？

    輕微稀釋放熱會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。因此，必須使用一致的緩沖液，或者設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)來消除背景稀釋放熱對(duì)結(jié)果的影響。

    滴定間隔時(shí)間不足會(huì)導(dǎo)致什么樣的結(jié)果呢？

    基線不穩(wěn)能反應(yīng)哪些問題？

    1.低基線